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小伙伴们,今天蒙CC带大家了解高通量药物筛选质细胞片新药研发中真正困难的从来不是找到化合物,而是如何从数万化合物中快速找到真正有效的那个。高通量药物筛选可分为基于靶点的筛选以及基于细胞表型的筛选。细胞活性实验是表型筛选中最基础、最直观的检测手段,可以快速筛选或剔除具有明显细胞毒性的化合物。最常用的细胞活性检测方法主要为CCK8法、MTP法、ATP法等,同学们可以根据自己实际情况进行选择。高通量筛选需要经过初筛、复筛以及化合物机制验证。需要注意的是,筛选过程中建议使用多样的检测方法交叉验证,以避免筛选法单一带来的假阳性结果。接下来蒙CC用一篇文献带大家进一步了解高通量药物筛选。TP53基因是常见的抑癌基因之一,作者发现在非洲后裔个体中TP53的突变体Y107H,希望通过高通量药物筛选,寻找能够干预Y107H突变体肿瘤生长的有效药物。作者选用了MC抗癌化合物库去进行筛选,在HCCT116细胞中加入各药物反应,72小时后检测细胞活力,共筛选出12个化合物。
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复筛时,作者使用llama blue法选取了其中两个谷氨酰胺酶抑制剂进行复筛,设置不同的浓度梯度去检测其对细胞活性的影响。实验结果表明,Y107H突变导致细胞更加依赖谷氨酰胺代谢,其中CB839药效更强,选择性更好。随后,作者在免疫缺陷型小鼠的成瘤实验中验证了CB839的肿瘤抑制作用。那么蒙CC来给大家总结一下,本研究通过MCE抗癌化合物库,从2000个分子中成功筛选出对TP53突变细胞具有选择性活性的候选化合物CB839,并通过动物实验和机制研究验证其抗肿瘤作用,充分体现了高通量筛选在新药发现中的重要价值。
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