AbMole 抑制剂丨 GSK-3484862：高选择性非核苷类 DNMT1 抑制剂，在 DNA 甲基化维持与表观遗传重编程研究中的应用

摘要：GSK-3484862（AbMole，M13815，CAS No.：2170136-65-7）属于非核苷类的可逆DNMT1 高选择性抑制剂，在生化实验中对DNMT1的IC50约为0.23 μM，对于 DNMT3A/3B 选择性大于 2500 倍。不同于传统胞苷类似物需要掺入 DNA 链才能发挥作用，GSK-3484862 能通过直接结合 DNMT1 的活性中心，在不引发 DNA 损伤，以及细胞凋亡的前提下直接诱导基因组的去甲基化，并能用于 DNA 甲基化修饰机制的解析，以及细胞表观遗传研究和重编程等相关科研实验。

一、GSK-3484862 的分子作用机制

GSK‑3484862（AbMole，M13815）属于双氰基吡啶类化合物。当 DNMT1 结合半甲基化的 DNA 时，GSK‑3484862可以利用自身的平面结构占据 DNMT1 的活性中心环，同时与 DNMT1 的特异性靶标识别结构域发生相互作用；上述结合模式赋予GSK‑3484862的高度亚型选择性，对 DNMT3A/3L、DNMT3B/3L等甲基转移酶几乎无抑制活性。GSK‑3484862（AbMole，M13815）的抑制作用可逆，不需要整合进入 DNA 链，规避传统胞苷类似物带来的 DNA 损伤和细胞死亡，能够在成体细胞、干细胞等多个细胞系中开展长时间的去甲基化干预。也有文献报道GSK‑3484862（R-GSK3482364）存在双重作用：一方面抑制 DNMT1 催化活性；另一方面还能介导 DNMT1 经由 UHRF1 依赖的蛋白酶体途径降解，因此数小时即可诱导基因组低甲基化；培养基中的GSK‑3484862撤去之后，细胞的甲基化水平可以恢复。

二、GSK-3484862 在细胞层面研究中的应用

GSK-3484862（AbMole，M13815）的细胞实验多用于基因组去甲基化、表观遗传机制探究以及细胞的重编程诱导。GSK-3484862在HCT116 结肠癌细胞中，能以剂量依赖性的方式造成基因启动子去甲基化，上调 Vimentin 等因甲基化而被沉默的基因表达水平。GSK-3484862在MV4-11 白血病细胞系中，1-2 天的处理即能检测出基因组的低甲基化，转录激活滞后约 2 天，细胞增殖抑制则出现在处理 4 天之后，能够观察表观遗传效应的时间顺序。此外，在成纤维的细胞重编程实验中，GSK-3484862可以诱导 Myod1 或者 Adipoq 基因表达，将 C3H/10T1/2 细胞重编程为肌细胞或者脂肪细胞，可用于细胞命运调控相关研究。GSK-3484862（R-GSK3482364）在小鼠胚胎干细胞中，可以实现接近 Dnmt1 敲除诱导的全基因组去甲基化，适合甲基化维持、早期胚胎基因的调控研究。

三、GSK-3484862 在动物实验研究中的应用

GSK-3484862（AbMole，M13815，2170136-65-7）在动物体内也表现表观遗传调节活性。例如在镰状细胞病转基因小鼠模型中，口服给予GSK3482364，动物耐受性良好，小鼠血红蛋白水平与阳性红细胞比例明显上升，证实非核苷类的 DNMT1 抑制剂在动物体内的可行性。在急性髓系白血病小鼠中，GSK-3484862与同系列化合物GSK-3685032（2170137-61-6）以45 mg/kg的剂量，有效抑制了肿瘤生长，延长生存期，同时血液毒性更低。

四、GSK-3484862 相关细胞实验（文献参考举例）

该方案用于 DNMT1 活性抑制验证，开展基因组、位点特异性去甲基化检测。

细胞系：人结肠癌 HCT116 或小鼠胚胎干细胞 mESC

检测指标与方法：GSK-3484862（0.03、0.1、0.3、1、3、10 μM）处理 1-6 天；Western blot 检测 DNMT1、UHRF1；LC-MS 检测基因组 5mC/5mdC；亚硫酸氢盐测序检测候选基因启动子甲基化；RNA-seq 分析转录激活；可添加蛋白酶体抑制剂 MG132 验证 DNMT1 降解通路。

给药浓度：0.03~10 μM

处理时长：DNMT1 蛋白降解检测 6-24 h；去甲基化、转录水平检测 2-6 天

参考文献：Chen Q, et al. GSK-3484862 targets DNMT1 for degradation in cells. NAR Cancer, 2023.

注：上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献调整。

五、GSK-3484862 相关动物实验（文献参考举例）

该方案适用于非核苷 DNMT1 抑制的体内去甲基化研究。

动物模型：镰状细胞病转基因小鼠

给药配制：口服给药，选用合适溶媒配制

给药剂量：参照原文设置剂量梯度，建议 10-45 mg/kg 开展预实验确定

给药方案：连续给药 2-4 周；监测血象、体重；实验终点检测外周血胎儿血红蛋白阳性红细胞比例，全血 5mC 水平，同步评估肝肾功能。

参考文献：Pappalardi M B, et al. Discovery of a first-in-class reversible DNMT1-selective inhibitor with improved tolerability and efficacy in acute myeloid leukemia. Nature Cancer, 2021, 2 (10): 1002-1017.

注：上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献调整。

总结

综上，GSK-3484862（AbMole，M13815，2170136-65-7）属于非核苷类的可逆 DNMT1 高选择性抑制剂，弥补了传统胞苷类似物对细胞的潜在影响，能用于 DNA 甲基化维持机制解析、表观遗传和细胞重编程相关研究。

本文所述均为科研试剂，仅供科学研究参考

参考文献

1 Pappalardi M B, et al. Discovery of a first-in-class reversible DNMT1-selective inhibitor with improved tolerability and efficacy in acute myeloid leukemia. Nature Cancer, 2021, 2(10): 1002-1017.

2 Chen Q, Liu B, Zeng Y, et al. GSK-3484862 targets DNMT1 for degradation in cells. NAR Cancer, 2023.

3 Chen Q, et al. GSK-3484862, a DNMT1 degrader, promotes DNMT3B expression in lung cancer cells. NAR Cancer, 2025.

4 Robert M F, Morin S, Beaulieu N, et al. DNMT1 is required to maintain CpG methylation and aberrant gene silencing in human cancer cells. Nature Genetics, 2003, 33(1): 61-65.

5 Lyko F. The DNA methyltransferase family: versatile players in epigenetic regulation. Nature Reviews Genetics, 2018, 19(2): 81-92.

6 Bestor T H. The DNA methyltransferases of mammals. Human Molecular Genetics, 2000, 9(16): 2395-2402.